Mutacje IDH1 i IDH2 w Glejakach cd

Klony genów IDH1 i IDH2 typu dzikiego otrzymano z Origene, a mutacje wprowadzono standardowymi metodami. Komórki zebrano 48 godzin po transfekcji, poddano odwirowaniu przy 1000 xg przez 10 minut w 4 ° C, przemyto jednokrotnie zimnym roztworem soli buforowanym fosforanem i poddano lizie w buforze zawierającym 0,1% Triton X-100. Następnie zostały one rozbite przez ultradźwięki i odwirowane przy 12 000 x g przez 30 minut. Supernatanty wykorzystano do pomiaru aktywności IDH. Poziom ekspresji dzikiego typu i zmutowanych białek IDH określono metodą Western blotting z użyciem przeciwciała przeciw FLAG, polipeptydową znacznikiem białkowym. Do każdej reakcji enzymatycznej dodano objętość lizatu komórkowego zawierającego taką samą ilość białka IDH do ml roztworu testowego zawierającego 33 mM buforu Tris, 0,33 mM EDTA, 0,1 mM NADP +, 1,33 mM chlorku manganu i 1,3. mM izocytanu. Aktywność IDH analizowano przez redukcję NADP + do NADPH, który mierzono w 25 ° C za pomocą spektrofotometrii przy 340 nm 5 razy na sekundę przez 300 sekund.
Dane kliniczne i przeżycie
Informacje kliniczne zawierały datę urodzenia, datę otrzymania próbki do badania, datę diagnozy patologicznej, datę i patologię dowolnej poprzedzającej diagnozy glejaka niższego stopnia, stosowanie lub niewykorzystanie radioterapii lub chemioterapii przed datą, kiedy uzyskano próbkę do badań, datę ostatniego kontaktu z pacjentem i stan pacjenta w momencie ostatniego kontaktu. Obliczyliśmy całkowity czas przeżycia pacjentów z antrlastycznymi astrogenami, w tym 38 pacjentów z mutacjami w IDH1 lub IDH2 i 14 z genami typu dzikiego, oraz u dorosłych pacjentów (.21 lat) z glejakami, w tym 14 pacjentów z mutacjami w IDH1 lub IDH2 i 115 z genami typu dzikiego, z zastosowaniem daty diagnozy histologicznej i daty ostatniego kontaktu z pacjentem lub śmiercią. W przypadku pacjentów z wtórnymi glejakami, przeżycie obliczono od daty diagnozy wtórnej. Siedmiu pacjentów z glejakiem nie zostało uwzględnionych w analizie statystycznej z powodu niewystarczających danych dotyczących przeżycia.
Projekt badania
Autorzy zaprojektowali badanie, zebrali i przeanalizowali dane, napisali manuskrypt i podjęli decyzję o opublikowaniu wyników. Sekwencjonowanie genów wykonała Agencourt Bioscience, filia Beckman Coulter. Główni autorzy zapewniają rękojmię kompletności i dokładności danych oraz analiz.
Analiza statystyczna
Zbadaliśmy związek pomiędzy występowaniem mutacji w IDH1 lub IDH2 a innymi zmianami genetycznymi za pomocą dokładnego testu Fishera. Wykreślono krzywe przeżycia Kaplan-Meier i porównano rozkłady przeżycia z zastosowaniem testu log-pant Mantel-Cox i testu Wilcoxona. Wszystkie podane wartości P są dwustronne, a wartości P mniejsze niż 0,01 uważano za wskazujące na istotność statystyczną.
Wyniki
Analiza sekwencji
Rysunek 1. Rysunek 1. Mutacje IDH1 i IDH2 w ludzkich glejakach. Panel A pokazuje mutacje w kodonie R132 w IDH1 i R172 w IDH2, które zidentyfikowano w ludzkich glejakach, wraz z liczbą pacjentów, którzy nosili każdą mutację
[przypisy: ropień podprzeponowy, zespół heerfordta, poradnia psychologiczna kraków ]

Powiązane tematy z artykułem: poradnia psychologiczna kraków ropień podprzeponowy zespół heerfordta